Уникальные фото ! На фото – Микротрубочки и актин в фибробластах. Фотография была получена при помощи микроскопа Nikоn Eclipse TE200 с объективом Plan Fluor Fluor 100x/1.30. Двойное иммунофлуоресцентное окрашивание на тубулин (первые антитела против тубулина, вторые антитела конъюгированы с флуорохромом Oregon Green) и актин (Rhodamin-Falloidin, Sigma). A – микротрубочки в клетке располагаются радиально. B – актин находится на краю ламеллы. C – наложение.
Молодой и активный фибробласт способен оценивать свое микроокружение и действовать именно там, где произошел сбой с помощью псевдоподий. Выдвигая псевдоподии в ответ на внешние сигналы, клетка пробует и оценивает свое окружение. Где можно лучше прикрепить эти псевдоподии? Куда можно и нужно ползти? Неравномерное образование, прикрепление и натяжение псевдоподий в разных участках поверхности клетки вызывает перестройку всего цитоскелета, сперва актинового, потом микротрубочкового. Реорганизуя цитоскелет, клетки запоминают результаты предыдущих проб, предыдущих псевдоподиальных реакций и стабилизируют направления будущих реакций. Таким образом, клетка все время исследует окружающий ее мир и меняет свое поведение в зависимости от результатов этого исследования. Один и тот же механизм в разных его модификациях обеспечивает и движение фибробластов при заживлении раны, и движения отростков нейронов при образовании нервной системы, и движение фибробласта в те места, где сейчас необходимо обновление межклеточного вещества и спиралей коллагена и сетки эластина и, вероятно, множество других процессов морфогенеза, приводящих к формированию нашего многоклеточного организма. При этом поведение каждой отдельной клетки социально разумно: оно согласовано с поведением окружающих ее клеток через сигналы, поступающие от клетки к клетке через жидкую среду или прямой клеточный контакт. Стимуляция стволовых клеток, с целью получения молодых фибробластов, кератиноцитов – одно из направлений применения пептида Аматокин.
Старение человеческого организма – это нормальная биологическая функция, способствующая прогрессивной эволюции вида. Старость и последующая смерть очищает популяцию от предков и создает условия развития потомкам – носителям новых полезных признаков. Существует великое множество теорий наступления старения. Основной их смысл сводится к двум, научным теориям – это теория маргинотомии и теория молекулярного, окислительного повреждения клеточных органелл свободными радикалами.
Молекулярная, окислительная теория старения. Многие клетки погибают раньше времени из-за свободно-радикальной атаки (оксидантный стресс). Повреждающее действие свободных радикалов известно давно. Свободные радикалы повреждают клеточные органеллы, приводят к «пробою» клеточных мембран, повреждают белки, аминокислоты, активизируют перекисное окисление липидов, и др. Именно свободные радикалы способны повреждать самые нежные клеточные органеллы – митохондрии. Как известно, с возрастом выработка собственных антиоксидантов снижается и естественная система антиоксидантной защиты становится не совершенна. В митохондриях снижается содержание коэнзима Q, который призван защитить митохондрии от оксидантов, так как в митохондриях происходит выработка энергии, перенос электронов и образование активных форм кислорода. Конечно, свободные радикалы повреждают и клеточные мембраны, и органеллы клеток, и ДНК, но самое важное это то, что повреждение митохондрий включает в клетках программу апоптоза или естественной клеточной гибели. В результате гибнет большое количество клеток, которые жизнеспособны и функциональны, имеют большой, неистраченный запас клеточных делений и высокую теломеру, которые были далеки от старения. Вместе с ними гибнет от апоптоза и их ближайшее окружение. Прямо таки от «ужаса» включают программу апоптоза клетки, находящиеся рядом с клеткой поврежденной свободными радикалами и включившей программу апоптоза. Это приводит к клеточному обеднению тканей, в первую очередь кожи, и именно этот механизм обуславливает преждевременное старение. Преждевременное старение посещает организм гораздо раньше, чем он должен постареть на самом деле. С генетически обусловленным старением бороться невозможно, но возможно полностью предотвратить наступление преждевременного старения.
Вторая теория старения – теория маргинотомии связывает старение с сокращением теломерной ДНК. Высокодифференцированные, специализированные клетки любой ткани организма, имеют ограниченную способность к пролиферации. Постепенное снижение скорости пролиферации клеток приводящее к ее остановке, называют клеточным или репликативным старением. Стареющие клетки постепенно утрачивают свою функцию. Именно они, оставаясь в тканях длительное время без деления и обновления, обуславливают проявление элементов старения, поскольку не замещаются на молодые, нормально функционирующие клетки. Они не могут пролиферировать из-за блока пролиферации, который «включает» теломера, пройдя необходимую цикличность делений. Теломера является мерой пролиферативного потенциала клеток. Концы хромосом защищены своеобразными наконечниками – это и есть теломеры. При каждом делении кончик молекулы как бы обрывается (на 50 – 200 нуклеотидов), поскольку аппарат копирования не в состоянии сделать полноразмерную копию молекулы ДНК, а также чтобы не происходило слияния хромосом, приводящее к генетическим поломкам. Теломера сокращается с каждым делением клетки и, сократившись до определенной длины включает блок пролиферации, а в последствии, программу апоптоза (естественной клеточной гибели). Хромосомы оканчиваются последовательностью ТТАGGG, повторенной в теломерах сотни и тысячи раз. Потери концевой ДНК делают невозможной бесконечную пролиферацию. Укорачивание хромосом до определенного размера индуцирует процессы клеточного старения. Число пройденных клеткой удвоений до «включения» блока пролиферации у разных клеток различно. Обычно это от 30 до 100 делений. ДНК – это единственная макромолекула, обладающая достаточной стабильностью, она и служит базой такого механизма. Клетка, которая укоротила свою теломеру до предела и включила блок пролиферации не будет делиться. Для того, чтобы клетка не утрачивала свою функцию, а продолжала делиться необходимо восстановить длину теломеры. Эта функция осуществляется теломеразой. Фермент теломераза присутствует далеко не во всех клетках тканей и именно поэтому невозможно заставить пролиферировать стареющую клетку. У дифференцированных, зрелых и специализированных клеток тканей организма этот фермент отсутствует. У взрослого человека теломераза в норме присутствует только в половых клетках и клетках-предшественниках. Так как теломеразы нет во взрослых, дифференцированных, специализированных клетках тканей, то восстановить цикличность делений у максимально укоротившей теломеру клетки невозможно. Однако этот процесс посещает организм гораздо позже, чем мы реально сталкиваемся с проявлениями элементов старения. Практически всегда организм страдает от преждевременного старения. Это происходит из-за преждевременной гибели большого количества нормально функционирующих клеток, что приводит к клеточному обеднению тканей.
Роль иммунной системы в регуляции клеточного деления.
Гуморальная составляющая межклеточных взаимодействий в иммунной системе опосредуется продуктами взаимодействующих клеток — сигнальными, информационными, регуляторными молекулами, цитокинами. Это белковые или полипептидные продукты активированных клеток иммунной системы, которые являются медиаторами межклеточных коммуникаций (взаимодействий) при иммунном ответе, гемопоэзе и развитии воспаления. Они являются эффекторами некоторых реакций иммунитета и служат связующим звеном между иммунной и другими системами организма. Значение цитокинов существенно выходит за рамки иммунологии, поскольку они играют важную роль в клеточном делении, обновлении тканей, кроветворении, и др. Кожа человека – не только защитный покров, но и активный орган иммунной системы, который обладает обратной связью с системой иммунитета. Это значит, что состояние кожных покровов регулируется иммунной системой и, наоборот, иммунная система зависит от функциональной активности кожных покровов. Быстро обновляющиеся ткани, такие как кровь и кожа находятся в прямой зависимости от состояния иммунной системы. Специализированные клетки кожи, взаимодействуя между собой, участвуют в формировании информационных молекул и синтезе каскада цитокинов, участвуют в иммунологическом ответе. Иммунная система выполняет в организме множество функций. Основные из них – это борьба с микробными агентами, возбудителями инфекционного поражения и восстановление целостности и функционирования органов и тканей организма. Именно от иммунной системы зависит формирование каскада цитокинов, ростовых факторов, информационных молекул, которые и восстанавливают кожные покровы и отвечают за репаративные процессы в коже и во всем организме. Для нормального деления клеток необходимо наличие ростовых факторов и цитокинов. Многие цитокины и являются факторами роста. Ростовые факторы способствуют удвоению ДНК в клетке и тем самым приводят клетку к переходу в митотическую фазу и собственно к митозу. Ростовые факторы необходимы для жизнеобеспечения клетки. Например, если из культуры клеток удалить цитокины и факторы роста, то клетка не только перестанет делиться, но и погибнет. Иммунная система отвечает за нормальное клеточное деление. Поэтому стареющей коже необходимо поддерживать местный иммунитет – как гарантию нормального клеточного обновления. Иммуномодуляция (усиление иммунитета) стареющей кожи приводит к активизации клеточного деления, к нормализации клеточного обновления и к профилактике и лечению возрастных изменений кожи, к сглаживанию проявлений старения. Своевременно начатая иммуномодулирующая терапия позволит избежать преждевременного старения и значительно отсрочить генетически детерминированное старение.
Доказано генетическое и структурное сходство эпидермиса и тимуса. Эпидермальные клетки, подобно тимусу, влияют на созревание и дифференцировку Т-лимфоцитов. Именно кератиноциты, которые в основном рассматриваются как производители кератина, обладают способностью к мощному воздействию на биологию Т-клетки. Кератиноциты кожи оказывают влияние на посттимусные этапы созревания Т-клеток. Кератиноциты, это «молчаливое большинство» клеток эпидермиса, являются, важным элементом иммунитета, они не только обеспечивают создание на поверхности тела защитного кератинового слоя и волосяного покрова, но и при определенных условиях вырабатывают активные вещества, способные глубоко воздействовать на функционирование других клеток кожи. Для этого им необходим определенный «толчок» – появление информационных молекул, сигнализирующих о необходимости клеточного обновления. Кроме кератиноцитов в формировании нормального иммунного ответа огромную роль выполняют клетки Лангерганса и Гренстейна.
В последнее время открыто много информационных молекул, отвечающих за клеточное взаимодействие. Широкое распространение получила пептидная регуляция, которая является одним из перспективных направлений в anti-age терапии. Такую терапию отличает ряд существенных достоинств и, в первую очередь, – патогенетическая обоснованность. При любом старении (хроностарение или преждевременное старение) происходит нарушение регуляции переноса информационных молекул между клетками, что неизбежно приводит к нарушению клеточного деления. Из тканей организма человека было выделено много пептидов, которые осуществляют межклеточные контакты. Это – индукторы иммунитета, пептиды, способствующие клеточному делению. Так же есть пептиды, отвечающие за сосудистый тонус, настроение и др. Современная наука позволяет сейчас получать такие пептиды не путем экстракции из тканей и органов, а путем химического, так называемого твердофазного пептидного синтеза.
Почему пептид Аматокин важен для стареющей кожи?
Пептид Аматокин восстанавливает нормальное клеточное обновление кожи. Он не только заботиться о клеточном обновлении, но способствует нормализации многих клеточных функций, что защищает клетки от гибели. Он приводит к появлению молодых клеток кожи и заботится о стареющих. Многие клетки погибают раньше времени из-за нарушения микроциркуляции и свободно-радикальной атаки. В результате нарушения микроциркуляции снижается приток питательных веществ и кислорода в клетки, что приводит к накоплению больших количеств кислых метаболитов и выработке свободных радикалов. Пептид Аматокин защитит эти клетки от гибели, а Гексапептид 20 восстановит микроциркуляцию.
Пептид Аматокин оказывает влияние на митотическое равновесие – соотношение делящихся, созревающих, функционирующих и погибающих клеток. Взаимодействуя с определенными рецепторами пептид Аматокин регулируют важнейшие функции:
– восстанавливает нормальный цикл деления зрелых, дифференцированных клеток;
– помогает низкодифференцированным клетками-предшественниками созревать, превращаясь в зрелые клетки;
– поддерживает высокую активность неспецифических защитных и репарационных внутриклеточных систем, повышает выживаемость клеток и снижает возможность возникновения апоптоза (естественной клеточной гибели) клеток при обычном течении процесса старения.
Совместно пептид Аматокин и Гексапептид 20 восполняют все, что необходимо стареющей кожи для её восстановления и регенерации, для нормализации обновления клеточного состава кожи, пополнения недостатка молодых и активных фибробластов, клеточному обновлению кератиноцитов. Доказана безопасность и эффективность этих пептидов, отсутствие побочных эффектов, отсутствие токсичности и тератогенности, что подтверждено документально в соответствующих тестах.
Регуляторный пептид Аматокин – стимулирует пролиферацию и дифференцировку стволовых клеток, клеток-предшественников кожи и образование новых, молодых клеток кожи (фибробластов, кератиноцитов). Так же пептид Аматокин заботиться о стареющих клетках. Он восстанавливает каскад биологически активных молекул, которые приводят к активизации естественного деления как юных, молодых, так и стареющих клеток. Это происходит благодаря влиянию на стареющие фибробласты, кератиноциты, Т-лейкоциты, клетки Лангерганса и моноциты. При взаимодействии пептида Аматокин с определенными рецепторами, расположенными на наружных мембранах стареющих клеток происходит их активизация. И стареющие клетки восстанавливают свою способность индуцировать определенный каскад биологически активных молекул, приводящий к активации клеток-предшественников и других клеток кожи, а так же те стареющие клетки, которые не израсходовали свой пролиферативный потенциал, нормализуют цикличность своего деления. Уникальный пептид Аматокин – это сигнальная молекула, обладающая иммуномодулирующим свойством. При местном применении обновляет клеточный состав, индуцирует клеточное деление, усиливает естественный механизм репарации и регенерации, восстанавливает цикличность деления в зрелых специализированных клетках, препятствует клеточной гибели, защищает клетки от повреждения. Пептид Аматокин позволяет получать новые молодые фибробласты и кератиноциты, действуя на те клетки, которые находятся на базальной мембране, в коже и в подкожной жировой клетчатке.
Старение, как было сказано выше, физиологический процесс и кожа не посылает сигналов о болезни. Она не посылает сигналов бедствия, не просит помощи, не «говорит» почини меня, как это делает раневая поверхность. Для кожи дряблость и появление морщин – это нормальное генетически запрограммированное явление. И поэтому ей надо помогать, надо послать сигнальную молекулу, обеспечивающую запуск всего комплекса репаративных процессов. Создать «стрессоподобную» ситуацию и тогда произойдет усиление естественного процесса репарации кожи, приводящее к обновлению клеточного состава кожи и омолаживающий эффект. Пептид Аматокин запускает целый каскад биологических молекул, которые синтезируются одна за другой в месте нанесения в коже. Это каскад цитокинов, факторов роста и информационных молекул. Клетки-предшественники высокочувствительны именно к цитокинам и ростовым факторам. Зрелые дифференцированные клетки тканей чувствительны к ростовым факторам только если они сохранили потенциал делений. Ликокин индуцирует синтез каскада цитокинов, таких как ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-8, и др., тех, которые модулируют в коже стрессоподобную ситуацию, многие из них являются провоспалительными и усиливающими репаративные процессы. Индуцирует каскад ростовых факторов, например, фактор стволовых клеток, ГМ-КСФ, Г-КСФ, М-КСФ. Индукция вышеперечисленных медиаторов происходит в коже, в месте нанесения, воздействуя на клеточные элементы кожи (кератиноциты, фибробласты, клетки Лангерганса, Т-хелперы, макрофаги, моноциты). В результате этого в коже повышаются концентрации ростовых факторов, таких как гранулоцитарный, макрофагальный, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующие факторы. Этот эффект аналогичен действию пилинга или микродермабразии.
Пептид Аматокин проявляет активность только в месте нанесения и не обладает резорбтивным действием. При нанесении пептида Аматокин мы не нарушаем установленного природой, только способствуем активизации нормальной репаративной функции.
ИЛ-1 – это один из главных в нашей жизни цитокинов, который появляется при любом повреждении тканей, при внедрении микроорганизмов и в комплексе с ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8 способствует восстановлению тканей, защищает кожу и активизирует репаративные процессы, действуя на клетки кожи, особенно выражено его действие на фибробласты, клетки Лангерганса, на Т-лимфоциты (Т-хелперы), что и приводит к усилению иммунитета. Именно ИЛ-1 совместно с фактором некроза опухоли альфа появляются первыми в ответ на применение Аматокина и способствуют синтезу остальных цитокинов и факторов роста в коже, непосредственно в месте нанесения. ИЛ-3 — преимущественно экстренный регулятор, проявляющий свое действие при стрессе и иммунном ответе. ИЛ-3 является ростовым фактором для тучных клеток слизистых оболочек (продуцирующих хондроитинфосфат) и усиливает ростстимулирующую активность ИЛ-4 в отношении тучных клеток соединительной ткани. Если ИЛ-3 является ростовым фактором для самых юных кроветворных элементов и стволовых клеток, то гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ), макрофагальный колониестимулируюший фактор (М-КСФ) поддерживают пролиферацию несколько более дифференцированных, хотя тоже юных клеток-предшественников. Так же ГМ-КСФ действует на формирование специализированных гранулоцитарных и моноцитарно-макрофагальных колоний, а также на активность зрелых моноцитов макрофагов, гранулоцитов и эозинофилов. ИЛ-8, или фактор аттракции нейтрофилов (NAP-1), относится к группе хемоаттрактивных пептидов — α-хемокинов. ИЛ-8 продуцируется многими типами клеток и обладает выраженными провоспалительными свойствами. Основным биологическим эффектом IL-8 является индукция хемотаксиса нейтрофилов, эозинофилов, базофилов и других клеток системы иммунитета. IL-8 усиливает пеоангиогенез in vivo и in vitro.
Биологические эффекты ИЛ-6 сходны с таковыми ИЛ-1 и фактора некроза опухоли (ФНОα). Прежде всего это участие в реализации воспалительной и иммунной реакций и кроветворения. Его действие на местные проявления воспаления аналогично действию ИЛ-1. Для него свойственно противовирусное действие. Выделяясь несколько позже, чем ИЛ-1 и ФНОα, ИЛ-6 подавляет их образование (они, наоборот, стимулируют его выработку) и поэтому относится к цитокинам, завершающим развитие воспалительной реакции.
В иммунной системе главной мишенью ИЛ-6 служат В-лимфоциты. ИЛ-6 является кофактором их пролиферации и самостоятельным дифференцировочным фактором. Он равномерно стимулирует выработку иммуноглобулинов всех классов. На клетки-предшественники ИЛ-6 действует в основном как кофактор, способствуя проявлению эффектов ИЛ-3, ГМ-КСФ и М-КСФ. В результате ИЛ-6 усиливает образование in vitro колоний всех типов. Не обладая самостоятельным радиозащитным действием, он повышает таковое ИЛ-1. ИЛ-6 является обязательным цитокином для поддержания жизнеспособности и пролиферативного потенциала стволовых клеток в культуре. Таким образом, ИЛ-6 представляет собой полифункциональный цитокин, продуцируемый фибробластами, макрофагами и другими клетками. По спектру биологического действия он близок ИЛ-1, участвует в развитии воспаления, иммунных реакций, в регуляции кроветворения, служит ростовым фактором для многих типов клеток, для фибробластов и кератиноцитов, участвует в межсистемных, межклеточных взаимодействиях.
Увеличение содержания этих факторов и есть каскад цитокинов и факторов роста необходимый для эффективного клеточного обновления клеток кожи. Синтез такого каскада цитокинов является доказательством эффективности Аматокина. Именно эти факторы приводят к пролиферации и дифференцировке стволовых клеток и клеток предшественников в зрелые, высокодифференцированные клетки кожи, восстанавливающие необходимое количество функционирующих клеток, что является профилактикой и борьбой со старением и возрастным клеточным обеднением. Каскад этих цитокинов и факторов роста свидетельствует о возможности пептида Аматокин влиять на возможность восстанавливать цикличность деления клеток и нормализацию клеточного взаимодействия друг с другом и препятствованию преждевременной клеточной гибели от апоптоза.
Изучение изменений микроциркуляции под действием Гексапептида 20.
Использовали ультразвуковой Доплеровский аппарат непрерывно-импульсного анализатора-монитора внутричерепного и периферического кровообращения “Ангиодин-ПК”. Всего 25 исследований. Исследования проводили на женщинах 35-55 лет. Измеряли состояние микроциркуляции до нанесения Гексапептида 20 и через 20 минут после нанесения. Получили следующие результаты:
Скорость кровотока увеличивалась в 1,8 раза у 85% женщин, у остальных увеличивалась в 1,2 -1,4 раз.
При этом происходит нормализация диаметра микрокапилляров, что видно из сглаженности краёв кривой (верхнего и нижнего), а так же видно усиление кровоснабжения исследуемой области, это выражается в усилении интенсивности окрашивания графика.
Вверху – до нанесения Гексапептида 20, Внизу – после нанесения Гексапептида 20.
Изучение регресса морщин под действием Аматокина и Гексапептида 20.
В клинических испытаниях участвовали 50 женщин – добровольцев. У всех достоверно уменьшались морщины, улучшался цвет лица, восстанавливались влажность кожи, подтягивался овал лица, все ощущали лифтинговый эффект сразу после нанесения и результат усиливался и кумулировался при более длительном применении. Через 2 месяца значительно снижались число и глубина морщин.
